AAV/LVV為載體的眼用注射液的不溶性微粒檢查

腺病毒相關病毒（adeno-associated virus，AAV）是一類單鏈線狀DNA缺陷型病毒，有多種血清型，且不同血清型的AAV具有不同的組織器官靶向性。通過修飾、突變AAV的外殼蛋白序列產生新的組織傾向性的血清型。安全性高、可長期表達，治療效果持久，且易于純化，被視為最有前途的基因轉移載體之一，在世界范圍內的基因治療和疫苗研究中得到廣泛應用。全球已有多個基因治療產品上市。

慢病毒載體（Lentivirus, LV）是細胞和基因療法常用的遞送載體之一，它的主要功能是將目的基因轉移并整合到宿主細胞的基因組中，可以用來研究基因水平上的生物學調控機制。作為一種宿主范圍很廣的病毒載體，它們能夠轉導分裂和非分裂細胞，例如神經元、造血干細胞和免疫細胞，尤其是T細胞。近年來，慢病毒轉導技術已經成功應用于CAR-T細胞的制備。

隨著AAV和LVV相關載藥技術的不斷進步，其相關制劑的不溶性微粒檢查也受到越來越多的關注，特別是基于AAV和LVV載藥技術的眼用注射液。眼用注射液作為眼用制劑的重要方面，其不溶性微粒檢查主要是參照USP789 眼用溶液的標準。

USP789關于不溶性微粒的檢查規定了兩種方法，第一種是光阻法，第二種是顯微計數法，但是兩種方法的判定標準是一致的，具體詳見下圖：

本文將通過一款特殊的LVV眼用注射液對比兩種方法的一個差別：

樣品信息如下：

光阻法-不溶性微粒測試結果如下圖所示：

由上圖可以看出，大于等于10μm以上的微粒為929.67個/ml，大于等于25μm以上的微粒為40.67個/ml，大于等于50μm以上的微粒為0個/ml，根據USP789光阻法判定標準，判定樣品不符合檢查的規定。

顯微計數法-不溶性微粒測試結果如下圖所示：

由上圖可以看出，大于等于10μm以上的微粒為9個/ml，大于等于25μm以上的微粒為3個/ml，大于等于50μm以上的微粒為2個/ml，根據USP789顯微計數法判定標準，判定樣品符合檢查的規定。

結論：

兩種不同的方法，測試結果確實有非常大的差別，主要原因是：

1 一般眼用注射液相關制劑裝量都比較少，要滿足光阻法的檢查一般需要混合多支進行檢查，或者進行稀釋進行檢查，無論哪種方法，在制樣的過程中容易產生氣泡，加上體系本身少量的硅油會被當成微粒，造成很多假性的結果，因此導致樣品測試結果不合格；

2 顯微計數法跟光阻法相比，是整支全部進行檢查，不需要考慮裝量的影響，制備樣品的過程中，同時可以去除氣泡和硅油等的影響，反映體系真實的不溶性微粒結果；同時可以通過觀察不溶性微粒的形貌去溯源不溶性微粒的來源，改善產品工藝，提高產品質量。

下圖為LVV眼用制劑中的一些特征不溶性微粒圖片：

檢查儀器如下圖所示：

胤煌科技(YinHuang Technology)是一家專注于為醫藥、半導體及化工材料等行業提供檢測分析設備及技術服務的高科技公司，致力于為客戶提供全面、準確的檢測分析和解決方案。主營產品包括不溶性微粒分析儀，可見異物檢查分析儀，原液粒度及Zeta電位分析儀，CHDF高精度納米粒度儀，高分辨納米粒度儀，溶液顏色測定儀，澄清度測定儀等，公司自主研發的YH-MIP系列顯微計數法不溶性微粒儀、YH-FIPS系列流式動態圖像法粒度儀，YH-FIPS系列微流成像顆粒分析儀已經在生物醫藥、半導體及材料化工領域得到廣泛應用。