咬文嚼字：胤煌科技帶您精讀中國藥典2020版0903不溶性微粒檢查法

中國藥典2020版0903不溶性微粒檢查法：

本法系用以檢查靜脈用注射劑（溶液型注射液、注射用無菌粉末、注射用濃溶液）及供靜脈注射用無菌原料藥中不溶性微粒的大小及數量。

（咬文嚼字1：上文說明一個事實，那就是靜脈用注射液如傳統的打吊瓶、屁股針、打疫苗及特殊病癥用藥如胰島素等注射液最終會進入靜脈血管的，都需進行不溶性微粒檢查。）

本法包括光阻法和顯微計數法。當光阻法測定結果不符合規定或供試品不適于用光阻法測定時，應釆用顯微計數法進行測定，并以顯微計數法的測定結果作為判定依據。

（咬文嚼字2：不溶性微粒檢查法有兩種具體方法，第二種方法是第一種方法的結果驗證，說明第一種方法在有些局限條件下是不準確的。）

光阻法不適用于黏度過高和易析出結晶的制劑，也不適用于進入傳感器時容易產生氣泡的注射劑。對于黏度過高，采用兩種方法都無法直接測定的注射液，可用適宜的溶劑稀釋后測定。

（咬文嚼字3：光阻法的實驗操作局限性很多，無法允許實驗員的細微實驗誤差，如搖晃、震蕩、樣品沉積等，而顯微計數法對顆粒進行清洗和分析，避免許多假性結果的影響。）

試驗環境及檢測 試驗操作環境應不得引入外來微粒，測定前的操作應在潔凈工作臺進行。玻璃儀器和其他所需的用品均應潔凈、無微粒。本法所用微粒檢查用水（或其他適宜溶劑），使用前須經不大于1.0μm的微孔濾膜濾過。

取微粒檢查用水（或其他適宜溶劑）符合下列要求：光阻法取50ml測定，要求每10ml含10μm及10μm以上的不溶性微粒數應在10粒以下，含25μm及25μm以上的不溶性微粒數應在2粒以下。顯微計數法取50ml測定，要求含10μm及10μm以上的不溶性微粒數應在20粒以下，含25μm及25μm以上的不溶性微粒數應在5粒以下。

（咬文嚼字4：實驗過程必須處于潔凈空間，無塵服和超凈臺就成了必bei環境，微粒檢查用水需要進行測定符合要求后使用，但這還不算完，每次使用前還得經不大于1μm的濾膜過濾，這是實驗前準備工作的bi備條件。）

第一法（光阻法）（所需儀器：光阻法不溶性微粒儀）

測定原理 當液體中的微粒通過一窄細檢測通道時，與液體流向垂直的入射光，由于被微粒阻擋而減弱，因此由傳感器輸出的信號降低，這種信號變化與微粒的截面積大小相關。

（咬文嚼字5：光阻法的測定原理是靠顆粒對光強的遮擋，然后將顆粒的最大截面等效為顆粒的大小，但顆粒的形狀千奇百怪，無法準確判定顆粒的真實大小。）

對儀器的一般要求 儀器通常包括取樣器、傳感器和數據處理器三部分。

測量粒徑范圍為2～100μm，檢測微粒濃度為0～10000個/ml。

儀器的校準  所用儀器應至少每6個月校準一次。

（1）取樣體積 待儀器穩定后，取多于取樣體積的微粒檢查用水置于取樣杯中，稱定重量，通過取樣器由取樣杯中量取一定體積的微粒檢查用水后，再次稱定重量。以兩次稱定的重量之差計算取樣體積。連續測定3次，每次測得體積與量取體積的示值之差應在±5%以內。測定體積的平均值與量取體積的示值之差應在±3%以內。也可釆用其他適宜的方法校準，結果應符合上述規定。

（2）微粒計數 取相對標準偏差不大于5%，平均粒徑為10μm的標準粒子，制成每1ml中含1000～1500微粒數的懸浮液，靜置2分鐘脫氣泡，開啟攪拌器，緩慢攪拌使其均勻（避免氣泡產生），依法測定3次，記錄5μm通道的累計計數，棄第一次測定數據，后兩次測定數據的平均值與已知粒子數之差應在±20%以內。

（3）傳感器分辨率 取相對標準偏差不大于5%，平均粒徑為10μm的標準粒子（均值粒徑的標準差應不大于1μm），制成每1ml中含1000～1500微粒數的懸浮液，靜置2分鐘脫氣泡，開啟攪拌器，緩慢攪拌使其均勻（避免氣泡產生），依法測定8μm、10μm和12μm三個通道的粒子數，計算8μm與10μm兩個通道的差值計數和10μm與12μm兩個通道的差值計數，上述兩個差值計數與10μm通道的累計計數之比都不得小于68%。若測定結果不符合規定，應重新調試儀器后再次進行校準，符合規定后方可使用。

（咬文嚼字6：光阻法儀器的傳感器經常會不準確，無法提供精確數據，且必須經常校準，校準結果都在允許的偏差內，說明該儀器的準確度并不高，在當前人們對生命安全越發重視的今天，醫藥研發并不允許出現如此多的誤差存在。）

如所使用儀器附有自檢功能，可進行自檢。

檢查法

（1）標示裝量為25ml或25ml以上的靜脈用注射液或注射用濃溶液除另有規定外，取供試品至少4個，分別按下法測定：用水將容器外壁洗凈，小心翻轉20次，使溶液混合均勻，立即小心開啟容器，先倒出部分供試品溶液沖洗開啟口及取樣杯，再將供試品溶液倒入取樣杯中，靜置2分鐘或適當時間脫氣泡，置于取樣器上（或將供試品容器直接置于取樣器上）。開啟攪拌，使溶液混勻（避免氣泡產生），每個供試品依法測定至少3次，每次取樣應不少于5ml，記錄數據，棄第一次測定數據，取后續測定數據的平均值作為測定結果。

（2）標示裝量為25ml以下的靜脈用注射液或注射用濃溶液除另有規定外，取供試品至少4個，分別按下法測定：用水將容器外壁洗凈，小心翻轉20次，使溶液混合均勻，靜置2分鐘或適當時間脫氣泡，小心開啟容器，直接將供試品容器置于取樣器上，開啟攪拌或以手緩緩轉動，使溶液混勻（避免產生氣泡），由儀器直接抽取適量溶液（以不吸入氣泡為限），測定并記錄數據，棄第一次測定數據，取后續測定數據的平均值作為測定結果。

（1）、（2）項下的注射用濃溶液如黏度太大，不便直接測定時，可經適當稀釋，依法測定。

也可采用適宜的方法，在潔凈工作臺小心合并至少4個供試品的內容物（使總體積不少于25ml），置于取樣杯中，靜置2分鐘或適當時間脫氣泡，置于取樣器上。開啟攪拌，使溶液混勻（避免氣泡產生），依法測定至少4次，每次取樣應不少于5ml。棄第一次測定數據，取后續3次測定數據的平均值作為測定結果，根據取樣體積與每個容器的標示裝置體積，計算每個容器所含的微粒數。

（3）靜脈注射用無菌粉末除另有規定外，取供試品至少4個，分別按下法測定：用水將容器外壁洗凈，小心開啟瓶蓋，精密加入適量微粒檢查用水（或適宜的溶劑），小心蓋上瓶蓋，緩緩振搖使內容物溶解，靜置2分鐘或適當時間脫氣泡，小心開啟容器，直接將供試品容器置于取樣器上，開啟攪拌或以手緩緩轉動，使溶液混勻（避免氣泡產生），由儀器直接抽取適量溶液（以不吸入氣泡為限），測定并記錄數據；棄第一次測定數據，取后續測定數據的平均值作為測定結果。

也可采用適宜的方法，取至少4個供試品，在潔凈工作臺上用水將容器外壁洗凈，小心開啟瓶蓋，分別精密加入適量微粒檢查用水（或適宜的溶劑），緩緩振搖使內容物溶解，小心合并容器中的溶液（使總體積不少于25ml），置于取樣杯中，靜置2分鐘或適當時間脫氣泡，置于取樣器上。開啟攪拌，使溶液混勻（避免氣泡產生），依法測定至少4次，每次取樣應不少于5ml，棄第一次測定數據，取后續測定數據的平均值作為測定結果。

（4）供注射用無菌原料藥按各品種項下規定，取供試品適量（相當于單個制劑的最大規格量）4份，分別置取樣杯或適宜的容器中，照上述（3）法，自“精密加入適量微粒檢查用水（或適宜的溶劑），緩緩振搖使內容物溶解"起，依法操作，測定并記錄數據，棄第一次測定數據，取后續測定數據的平均值作為測定結果。

（咬文嚼字7：藥典規定光阻法檢查前需“小心翻轉20次"、“混合均勻"、“緩緩振搖"等均可能產生氣泡、新的粒子、容器顆粒污染、新的化學反應等導致實驗結果出現誤差的情況出現，故不推薦使用光阻法。）

結果判定

（1）標示裝量為100ml或100ml以上的靜脈用注射液除另有規定外，每1ml中含10μm及10μm以上的微粒數不得過25粒，含25μm及25μm以上的微粒數不得過3粒。

（2）標示裝量為100ml以下的靜脈用注射液、靜脈注射用無菌粉末、注射用濃溶液及供注射用無菌原料藥除另有規定外，每個供試品容器（份）中含10μm及10μm以上的微粒數不得過6000粒，含25μm及25μm以上的微粒數不得過600粒。

（咬文嚼字8：《中國藥典》對注射劑中不溶性微粒的控制僅限于粒徑≥10和25 μm的微粒數，對粒徑＜10μm的卻沒有具體要求，實際上，人體最小的毛細血管內徑僅有4～7 μm，嬰、幼兒的毛細血管更細，只有粒徑在2 μm以下的微粒才可能通過腎交換被排出體外，而粒徑為2～10 μm的微粒無法被排出。微粒進入體內造成危害的部位一般多在肺、腦、腎、眼等處，較大的微粒會直接造成局部循環障礙、引起血管栓塞或導致肉芽腫，且有短期內可見的特點，而粒徑為2～10 μm的微粒則可能造成潛伏性的更大危害。）

第二法（顯微計數法）（所需儀器：顯微計數法不溶性微粒儀）

對儀器的一般要求  儀器通常包括潔凈工作臺、顯微鏡、微孔濾膜及其濾器、平皿等。

潔凈工作臺  高效空氣過濾器孔徑為0.45μm，氣流方向由里向外。

顯微鏡  雙筒大視野顯微鏡，目鏡內附標定的測微尺（每格5～10μm）。坐標軸前后、左右移動范圍均應大于30mm，顯微鏡裝置內附有光線投射角度、光強度均可調節的照明裝置。檢測時放大100倍。

微孔濾膜  孔徑0.45μm、直徑25mm或13mm，一面印有間隔3mm的格柵；膜上如有10μm及10μm以上的不溶性微粒，應在5粒以下，并不得有25μm及25μm以上的微粒，必要時，可用微粒檢查用水沖洗使符合要求。

檢查前的準備  在潔凈工作臺上將濾器用微粒檢查用水（或其他適宜溶劑）沖洗至潔凈，用平頭無齒鑲子夾取測定用濾膜，用微粒檢查用水（或其他適宜溶劑）沖洗后，置濾器托架上；固定濾器，倒置，反復用微粒檢查用水（或其他適宜溶劑）沖洗濾器內壁，控干后安裝在抽濾瓶上，備用。

（咬文嚼字9：顯微計數法，顧名思義，借助顯微鏡進行計數，傳統的顯微鏡計數，通過印有格柵的標準濾膜進行過濾干燥，人眼進行觀察計數，由于人工操作計數，成百上千的粒子在視野中呈現，會導致視覺疲勞最終引起實驗結果的誤差，當前市場上已經有通過圖像算法進行顆粒計數的顯微計數法不溶性微粒儀，無需人眼觀察計數，全程由計算機進行處理計數，結果準確度高且方便快捷。）

檢查法

（1）標示裝量為25ml或25ml以上的靜脈用注射液或注射用濃溶液除另有規定外，取供試品至少4個，分別按下法測定：用水將容器外壁洗凈，在潔凈工作臺上小心翻轉20次，使溶液混合均勻，立即小心開啟容器，用適宜的方法抽取或量取供試品溶液25ml，沿濾器內壁緩緩注入經預處理的濾器（濾膜直徑25mm）中。靜置1分鐘，緩緩抽濾至濾膜近干，再用微粒檢查用水25ml，沿濾器內壁緩緩注入，洗滌并抽濾至濾膜近干，然后用平頭鑷子將濾膜移置平皿上（必要時，可涂抹極薄層的甘油使濾膜平整），微啟蓋子使濾膜適當干燥后，將平皿閉合，置顯微鏡載物臺上。調好入射光，放大100倍進行顯微測量，調節顯微鏡至濾膜格柵清晰，移動坐標軸，分別測定有效濾過面積上最長粒徑大于10μm和25μm的微粒數。計算三個供試品測定結果的平均值。

（2）標示裝量為25ml以下的靜脈用注射液或注射用濃溶液除另有規定外，取供試品至少4個，用水將容器外壁洗凈，在潔凈工作臺上小心翻轉20次，使混合均勻，立即小心開啟容器，用適宜的方法直接抽取每個容器中的全部溶液，沿濾器內壁緩緩注入經預處理的濾器（濾膜直徑13mm）中，照上述（1）同法測定。

（3）靜脈注射用無菌粉末及供注射用無菌原料藥除另有規定外，照光阻法中檢查法的（3）或（4）制備供試品溶液，同上述（1）操作測定。

結果判定

（1）標示裝量為100ml或100ml以上的靜脈用注射液除另有規定外，每1ml中含10μm及10μm以上的微粒數不得過12粒，含25μm及25μm以上的微粒數不得過2粒。

（2）標示裝量為100ml以下的靜脈用注射液、靜脈注射用無菌粉末、注射用濃溶液及供注射用無菌原料藥除另有規定外，每個供試品容器（份）中含10μm及10μm以上的微粒數不得過3000粒，含25μm及25μm以上的微粒數不得過300粒。

（咬文嚼字10：顯微計數法不溶性微粒儀，可以將注射液中的不溶性微粒全部呈現在一張照片中，通過外表觀察及機器判斷，來追查出粒子的真實來源，并在往后的實驗或生產中加以改進或避免。不僅可以統計出藥典需求的顆粒數據統計，且可以觀察各個顆粒的真實長寬高，從而為實驗人員提供建議和意見。）